产品简介：

游离巯基检测试剂盒(DTNB法)，即Free Sulfhydryl Assay Kit with DTNB或Free Thiol Assay Kit with DTNB，也称游离巯基含量检测试剂盒、游离巯基定量检测试剂盒，是一种高效、便捷的用于细胞培养上清液、血清、血浆、细胞及组织裂解液样品中暴露的或表面的游离巯基(Exposed/Surface free sulfhydryl groups)检测试剂盒。本试剂盒采用显色法(吸光度法)进行检测。

巯基(Sulfhydryl groupsor Thiols)，又称氢硫基或硫醇基，化学式为-SH。巯基是生物系统中反应性非常强并且广泛存在的基团之一，它存在于大多数蛋白质中，也存在于一些低分子量物质中，如谷胱甘肽(GSH)、C_OA、脂酸、DTT、巯基乙酸盐和游离半胱氨酸等。 蛋白质中的游离巯基通常分为暴露的游离巯基(Exposed/Surface free sulfhydryl groups) 和在蛋白质高级结构中的游离巯基(Buried free sulthydryl groups)，两者之和为总游离巯基(Total free sulthydryl groups or unbound thiols)。通常蛋白质中的游离巯基指的是暴露的游离巯基，即活性巯基，主要存在于半胱氨酸中，是蛋白质结构和生物体内某些氧化还原反应的重要基团，在蛋白质中两个巯基脱氢而形成的二硫键(-S-S,Disulfide bonds)，使相邻多肽得以连接。本试剂盒可用于蛋白或非蛋白样品中暴露的或表面的游离巯基的检测。

生物体内的巯基主要为谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基，其中谷胱甘肽巯基主要参与修复氧化损伤的蛋白质和活性氧的清除；蛋白质巯基则主要通过形成二硫键发挥维持蛋白质构象的作用，而蛋白质中检测到增多的游离巯基则提示二硫键发生断裂，蛋白质结构发生变化。目前，巯基传统的测定方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳法(CE)、液相色谱-质谱联用法(HPLG-GC)等。虽然这些方法在游离巯基检测的灵敏度和准确度上有一定优势，但是样品处理和实验操作相对复杂、对仪器的要求较高、检测耗时较长、且无法同时检测多个样品。

本试剂盒采用经典的基于DTNB的游离巯基定量检测方法。5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(5,5-Dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid)，DTNB)，又称为6,6'-二硝基-3,3'-二硫代苯甲酸、Ellman试剂(Ellman Reagent)、二硫代硝基苯甲酸或双(3-羧基-4-硝基苯基)二硫，是一种与巯基相互作用的水溶性试剂，可用于组织、蛋白质和多肽中游离巯基含量的测定，基本反应原理如下：游离巯基(R-SH)与DTNB反应生成黄色可检测的2-硝基-5-硫代苯甲酸盐阴离子(TNB)和混合二硫化物(R-S-TNB)，TNB在412nm处有强吸收峰，通过酶标仪测定此处的吸光度，并以谷胱甘肽为标准品，可计算出样品中游离巯基含量。

本试剂盒仅可检测暴露的或表面的游离巯基，如需检测总游离统基，可使用总巯基检测试剂盒(DTNB法)；如需检测蛋白质中二硫键的含量，可以使用蛋白质半胱氨酸检测试剂盒 (DTNB法)，同时设置未添加Reduction Bufer的样品组，通过相应的差值就能计算出蛋白质中的二硫键含量；如需检测谷胱甘肽，可使用总谷胱甘肽检测试剂盒、GSH和GSSG检测试剂盒。

本试剂盒样品处理简单，检测速度快。对于细胞培养上清液、血清、血浆可直接检测；对于细胞及组织样品只需匀浆裂解，取上清进行检测。整个检测过程不足半小时即可完成。

本试剂盒的Assay Buffer经过优化，可螯合可以氧化巯基的二价金属离子，防止样品被氧化导致样品中巯基含量低于实际值。

本试剂盒提供了检测所需的DTNB和Assay Bufer，同时还提供GSH作为标准品或阳性对照(Positive control)。

本试剂盒检测GSH标准曲线的效果如图2所示。最低检测限约为10μM

用于96孔板检测时，本试剂盒小包装的可以进行100-200次检测，中包装可以进行500-1000次检测。

本产品仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。